샘플 준비 및 슬롯 사이트

슬롯 사이트 준비

질량 분석법 실험에서 귀중한 정보를 얻으려면 깨끗하고 신중하며 대상 샘플 준비가 필수적입니다. 잘 설계된 샘플 준비 슬롯 사이트은 각질에 의한 오염을 피하고 관심있는 모든 단백질을 추출해야하며 관심이없는 단백질을 제거해야합니다.

샘플은 고객 또는 네바다 슬롯 사이트테오믹스 센터에서 준비 할 수 있습니다. 질량 분석을위한 완벽한 샘플에는 단백질이지만 핵산, 염, 복합 탄수화물 또는 지질은 거의 없습니다.

매우 복잡한 샘플의 경우, 샘플에서 단백질의 사전화, 각 분획의 LC-MS 분석은 그러한 사전 분획없이 볼 수있는 것보다 많은 단백질을 식별 할 수 있습니다. 이것은 일반적으로 전하에 기초하여 단백질 또는 슬롯 사이트테아제 단편을 분리하여 수행됩니다.

단백질 또는 펩티드는 Thermo Scientific Ulti-Mate 3000 HPLC에서 기본 역 위상 HPLC에 의해 분리 될 수 있습니다. 분수는이 기기에 의해 자동으로 수집 된 다음 분석됩니다.

전하별 분리를위한 대체 방법은 솔루션 내일 등전 초점입니다. 슬롯 사이트 준비 실험실에는이를 달성 할 수있는 두 가지 기기가 있습니다.

질량 사양에 의해 분석되기 전에 대부분의 단백질은 더 작은 조각으로 나뉩니다. 이것은 슬롯 사이트테아제, 일반적으로 트립신 및 LYS-C로 소화되지만 선택한 또 다른 슬롯 사이트테아제 일 수 있습니다.

100 FMOL 단백질, 용액의 단백질, 겔 슬라이스 또는 쿠마시 염색으로 보이는 반점 일 수 있습니다..

이들은 겔 내 또는 솔루션 내 단백질 소화를위한 기본 슬롯 사이트입니다. 제발슬롯문의하기더 자세한 슬롯 사이트 준비 방법을 찾고 있다면

다음 겔 내 소화 슬롯 사이트은 최대 3-1mm 라운드 젤 조각에 사용됩니다. 모든 젤 조각이 모든 단계에 대한 용액으로 완전히 덮여 있도록 추가 젤 조각으로 시작하는 경우 방법을 수정해야합니다.

젤 플러그에 50μL ABC를 추가하고 5 분 동안 실온 (RT)에서 배양합니다.
솔루션 폐기하고 50μl ACN을 추가하고 5 분 동안 RT에서 배양하십시오.
두 단계를 모두 반복하십시오.
솔루션 폐기하고 40μl DTT를 첨가하고 가열을 60C에 넣고 10 분 동안 배양합니다. 15 분을 식히십시오.
솔루션 폐기하고 30μl IA를 추가하십시오. Rt.에서 35 분 동안 배양
위에 언급 된대로 ABC 및 ACN으로 솔루션을 버리고 세탁하십시오.
15μL의 트립신 용액을 첨가하고 10 분 동안 배양하십시오.
참고 : 첨가 직전에 트립신 용액을 만듭니다. 트립신을 0.3% 포름산에 용해시켜 0.1UG/UL 용액을 제공하고 25mm ABC에서 5Ng/ul로 희석합니다.
10μL ABC를 추가하고 37C에서 4 시간 동안 배양합니다.
15μl 0.3% 포름산을 추가합니다.

<20 μl 샘플 버퍼의 샘플로 시작합니다.

20μl ACN을 추가하고 20 분 동안 RT에서 배양하십시오.
40μl DTT, 가열을 60C에 추가하고 10 분 동안 배양하십시오.
15 분을 식히자.
20μl IA를 추가하십시오. Rt.에서 35 분 동안 배양
20μL의 트립신 용액을 첨가하고 10 분 동안 배양하십시오.
참고 : 첨가 직전에 트립신 용액을 만듭니다. 트립신을 0.3% 포름산에 용해시켜 0.1UG/UL 용액을 제공하고 25mm ABC에서 5Ng/ul로 희석합니다.
10μL ABC를 추가하고 37C에서 4 시간 동안 배양합니다.
20μl 0.3% 포름산을 추가합니다.