효소 단백질 소화
질량 사양에 의해 피망 슬롯되기 전에 대부분의 단백질은 작은 조각으로 나뉘어져야합니다. 이것은 프로테아제, 일반적으로 트립신 및 LYS-C로 소화되지만 선택의 또 다른 프로테아제 일 수 있습니다.
요구 사항
100 FMOL 단백질, 용액의 단백질, 겔 슬라이스 또는 쿠마시 염색으로 보이는 반점 일 수 있습니다..
액체 크로마토 그래피/질량 피망 슬롯법 (LC/MS)
- Thermo Ultimate 3000 Nanolc 시스템과 결합 된 ETD를 사용한 Thermo Scientific Orbitrap Eclipse.
- Bruker Timstof Pro2, Bruker Nanoelute Lc.에 결합합니다.
- Evosep One LC는 주로 전혈, 혈청 및 소변과 같은 임상 피망 슬롯에 사용됩니다. 실험에 따라 Eclipse 또는 Timstof와 결합 할 수 있습니다
- 단백질 식별은 겔 밴드 또는 용액에서 수행 될 수 있습니다.
- Proteome 특성화는 레이블이 없거나 등방적으로 표시된 접근법을 사용하여 수행됩니다.
- 탠덤 질량 태그 (TMT)는 다차원 HPLC를 사용하여 피망 슬롯됩니다. 첫 번째 차원은 기본 RPHPLC와 Eclipse에서 전통적인 역 위상 HPLC입니다.
- 데이터 독립적 인수 (DIA)는 Eclipse 또는 Timstof를 사용하여 수행되며 Biognosy의 Spectronaut 소프트웨어를 사용하여 처리 된 데이터..
- Targeted Proteomics는 Eclipse 또는 Timstof에서 수행됩니다.
- 데이터 피망 슬롯은 Biognosys Spectronaut 또는 Thermo Scientific의 Sequest® 및 Proteome Discoverer를 사용하여 수행됩니다. 자유 시청자가있는 Spectronaut 또는 Proteome Software 스캐 폴드를 통해 데이터 출력이 사용자에게 제공됩니다.
요구 사항
열에서 트립신 다이제스트의 50 FMOL;<5% 아세토 니트릴의 수용액에서 샘플, <0.01% (w/v) 세제 농도.
